Plasmide CRISPR d'Activation (h) Laminin α-1: sc-401176-ACT

LAMA1 code la laminine α‑1, une sous-unité majeure de la laminine‑111 et d’hétérotrimères apparentés de laminines de la membrane basale, qui organisent la matrice extracellulaire et régulent l’architecture tissulaire. Grâce à ses interactions avec les intégrines, le dystroglycane et d’autres récepteurs de la matrice, la laminine α‑1 favorise l’adhésion, la polarité, la migration et la survie cellulaires, et module des voies de signalisation telles que l’adhésion focale/FAK, PI3K–AKT et MAPK. LAMA1 est particulièrement importante pour la morphogenèse au cours du développement ainsi que pour l’intégrité des membranes basales épithéliales et endothéliales, en façonnant le dialogue cellule–matrice et la mécanotransduction. Des réseaux de laminine dérégulés et une expression altérée de LAMA1 sont impliqués dans des maladies congénitales de la membrane basale, des phénotypes neurodéveloppementaux et le remodelage pathologique observé dans divers contextes cancéreux et fibrosants.

Laminin α-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Laminin α-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Laminin α-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Laminin α-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Laminin α-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.