Lamin B2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401873-ACT

LMNB2 kodiert Lamin B2, einen zentralen Bestandteil der nukleären Lamina, der unterhalb der inneren Kernmembran polymerisiert und so die Kernform sowie die mechanische Stabilität aufrechterhält. Lamin B2 ist an der Verankerung von Chromatin, der zeitlichen Steuerung der DNA-Replikation und der Wiederzusammensetzung der Kernhülle während der Mitose beteiligt und verknüpft damit die Genomorganisation mit Zellzyklusprogression und Stressantworten. Über Interaktionen mit laminassoziierten Domänen und Kernporenkomplexen beeinflusst es Transkriptionsprogramme und Signalwege zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität. Eine veränderte Funktion der Lamin‑B‑Familie ist mit Defekten der Kernarchitektur, einer abweichenden Chromatinorganisation und Phänotypen verbunden, die für vorzeitige Alterung, Neuroentwicklung und die Biologie von Krebszellen relevant sind.

Lamin B2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LMNB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Lamin B2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LMNB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LMNB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Lamin B2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LMNB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Lamin B2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Lamin B2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LMNB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.