Plasmide CRISPR d'Activation (h) Lamin B2: sc-401873-ACT

LMNB2 code la lamine B2, un composant essentiel de la lamina nucléaire qui polymérise sous la membrane nucléaire interne afin de maintenir la forme du noyau et sa stabilité mécanique. La lamine B2 participe à l’ancrage de la chromatine, au contrôle du calendrier de réplication de l’ADN et à la reconstitution de l’enveloppe nucléaire pendant la mitose, reliant l’organisation du génome à la progression du cycle cellulaire et aux réponses au stress. Grâce à ses interactions avec les domaines associés aux lamines et les complexes de pores nucléaires, elle influence les programmes transcriptionnels et les voies impliquées dans l’intégrité du génome. Des altérations de la fonction de la famille des lamines B sont associées à des défauts d’architecture nucléaire, à une organisation anormale de la chromatine et à des phénotypes pertinents pour le vieillissement prématuré, le neurodéveloppement et la biologie des cellules cancéreuses.

Lamin B2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LMNB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Lamin B2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LMNB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LMNB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Lamin B2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LMNB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Lamin B2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Lamin B2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LMNB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.