Plasmide Double Nickase (h) Lamin A: sc-400039-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Lamin A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lamin A Double Nickase (h) et le plasmide Lamin A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LMNA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Lamin A Antibody (C-3): sc-518013
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Lamin A | sc-400039-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Lamin A | sc-400039-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **LMNA** code la lamine A, un composant central de la lamina nucléaire qui assure la stabilité mécanique et organise l’architecture de la chromatine de haut niveau à la périphérie du noyau. La lamine A participe à la régulation du génome via les domaines associés aux lamines (LAD), influençant les programmes transcriptionnels, la synchronisation de la réplication de l’ADN et l’état épigénétique, et elle soutient l’intégrité de l’enveloppe nucléaire au cours du cycle cellulaire. **LMNA** interagit avec les voies de signalisation des dommages à l’ADN et de mécanotransduction, reliant les forces du cytosquelette à la forme nucléaire et à l’expression génique. La perturbation de l’homéostasie de la lamine A est associée à diverses laminopathies, notamment des spectres de cardiomyopathies et de dystrophies musculaires, des phénotypes de vieillissement prématuré, ainsi qu’à des altérations de la morphologie nucléaire pertinentes pour la biologie du cancer et des cellules souches.
Lamin A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LMNA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LMNA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LMNA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LMNA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.