Plasmide CRISPR d'Activation (h) Lamin A: sc-400039-ACT

LMNA code la lamine A, une protéine de filament intermédiaire de type V qui polymérise avec la lamine C pour former la lamina nucléaire et assurer l’intégrité de l’enveloppe nucléaire. La lamine A régule l’organisation de la chromatine, la stabilité du génome et la mécanotransduction en reliant le nucléosquelette au cytosquelette via le complexe LINC, influençant ainsi les programmes transcriptionnels et les réponses aux dommages de l’ADN. Elle intervient aussi dans des processus tels que la fonction des pores nucléaires, la réassemblage du noyau après la mitose et le positionnement des domaines associés à la lamina (LAD), qui, ensemble, façonnent le destin cellulaire et la signalisation du stress. Une dérégulation de LMNA est associée à des laminopathies touchant les tissus musculaire, adipeux et cardiaque, et le gène est fréquemment étudié pour ses rôles dans les phénotypes de vieillissement prématuré, les anomalies de la morphologie nucléaire et les modifications de l’expression génique.

Lamin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LMNA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Lamin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LMNA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LMNA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Lamin A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LMNA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Lamin A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Lamin A dans les cellules tumorales présentant une expression de LMNA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.