Plasmide Double Nickase (m) LAL: sc-421438-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) LAL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LAL Double Nickase (m) et le plasmide LAL Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Lipa. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LAL Antibody (9G7F12): sc-58374
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) LAL | sc-421438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) LAL | sc-421438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Lipa** code la lipase acide lysosomale (LAL), une hydrolase qui clive les esters de cholestérol et les triglycérides dans les lysosomes afin de produire du cholestérol libre et des acides gras. Cette activité soutient le renouvellement intracellulaire des lipides, le transport du cholestérol et l’homéostasie métabolique, en influençant la fonction lysosomale et des programmes de signalisation sensibles aux lipides. Le catabolisme lipidique dépendant de la LAL s’articule avec des voies régissant la prise en charge des lipoprotéines, la dynamique autophagie–lysosome et les réponses inflammatoires à l’accumulation lipidique. La perturbation de la fonction de Lipa/LAL est fréquemment étudiée dans le cadre de phénotypes de stockage lipidique lysosomal et des mécanismes de stress métabolique en aval, pertinents pour la biologie hépatique et celle des cellules immunitaires.
LAL Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lipa dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lipa. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lipa. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lipa.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.