LAL Plasmide Double Nickase (m): sc-421438-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAL Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LAL Double Nickase Plasmid (m) e il LAL Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lipa. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LAL Antibody (9G7F12): sc-58374
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAL Plasmide Double Nickase (m) | sc-421438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LAL Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Lipa** codifica la lipasi acida lisosomiale (LAL), un’idrolasi che scinde esteri del colesterolo e trigliceridi all’interno dei lisosomi per generare colesterolo libero e acidi grassi. Questa attività sostiene il turnover lipidico intracellulare, il traffico del colesterolo e l’omeostasi metabolica, influenzando la funzione lisosomiale e i programmi di segnalazione sensibili ai lipidi. Il catabolismo lipidico dipendente da LAL interagisce con vie che regolano la gestione delle lipoproteine, la dinamica autofagia-lisosoma e le risposte infiammatorie all’accumulo di lipidi. L’alterazione della funzione di Lipa/LAL è comunemente studiata nel contesto di fenotipi di accumulo lipidico lisosomiale e dei meccanismi di stress metabolico a valle, rilevanti per la biologia delle cellule epatiche e immunitarie.
LAL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lipa nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lipa. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lipa. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lipa interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.