L-type Ca⁺⁺ CP β4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419412

Übersicht

Cacnb4 kodiert die β4‑Hilfsuntereinheit der L‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanäle und reguliert den Transport der Kanäle, ihre Stabilität in der Membran sowie die Gating‑Kinetik, die den Ca²⁺‑Einstrom in erregbaren Geweben prägt. Durch die Feinabstimmung des aktivitätsabhängigen Calciumeinstroms beeinflusst β4 Ca²⁺‑abhängige Signalkaskaden, die Membrandepolarisation mit Neurotransmitterfreisetzung, Genexpression und synaptischer Plastizität koppeln. In Mausmodellen stört eine veränderte Cacnb4‑Funktion die neuronale Erregbarkeit und die Synchronisation von Netzwerken, was diesen Signalweg mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen sowie einer erhöhten Anfallsanfälligkeit in Verbindung bringt. Die Rolle des Proteins bei der Kontrolle der Zusammensetzung von Calciumkanälen macht es zudem relevant für Studien zur Reifung neuronaler Schaltkreise und zu aktivitätsabhängigen zellulären Stressantworten.

Das L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cacnb4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cacnb4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cacnb4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-type Ca++ CP β4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cacnb4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-type Ca++ CP β4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cacnb4-Exone abzielen, die für die L-type Ca++ CP β4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cacnb4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cacnb4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-type Ca++ CP β4 HDR-Plasmid (m) und L-type Ca++ CP β4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cacnb4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cacnb4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.