Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1F (h): sc-416338
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- L-type Ca++ CP α1F Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique L-type Ca++ CP α1F, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: L-type Ca++ CP α1F Antibody (1H6): sc-517005
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1F (h) | sc-416338 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CACNA1F code la sous-unité α1F formant le pore d’un canal calcique de type L dépendant du voltage, qui médie l’entrée de Ca2+ dans les cellules excitables et couple la dépolarisation membranaire à la signalisation intracellulaire. L’activité du canal module des processus dépendants du calcium, notamment la transmission synaptique, la libération de neurotransmetteurs et l’expression génique régulée par l’activité, via des voies telles que CaM/CaMK et la signalisation calcineurine–NFAT. Dans la rétine humaine, la fonction de CACNA1F est particulièrement importante pour la neurotransmission des photorécepteurs vers les cellules bipolaires et le traitement des signaux visuels. Des altérations génétiques de CACNA1F ont été associées à des affections rétiniennes héréditaires et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui confirme son intérêt pour l’étude de la biologie des canaux Ca2+ et des mécanismes de maladie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1F (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CACNA1F dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CACNA1F, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CACNA1F à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine L-type Ca++ CP α1F.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CACNA1F pour l'étude de la signalisation de L-type Ca++ CP α1F, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CACNA1F essentiels à la fonction de L-type Ca++ CP α1F
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CACNA1F pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le L-type Ca++ CP α1F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le L-type Ca++ CP α1F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CACNA1F. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le L-type Ca++ CP α1F plasmide HDR (h) et le L-type Ca++ CP α1F (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CACNA1F pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CACNA1F définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.