Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) L-type Ca++ CP α1D: sc-401745-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)L-type Ca++ CP α1D consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa L-type Ca++ CP α1D (h) y el plásmido de doble nickasa L-type Ca++ CP α1D (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CACNA1D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: L-type Ca++ CP α1D Anticuerpo (E-3): sc-515679
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) L-type Ca++ CP α1D | sc-401745-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) L-type Ca++ CP α1D | sc-401745-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1D codifica la subunidad α1D formadora del poro de los canales de calcio tipo L dependientes de voltaje (CaV1.3), que median la entrada de Ca2+ inducida por la despolarización de membrana y moldean el acoplamiento entre excitación y transcripción. La entrada de calcio dependiente de CaV1.3 regula los patrones de disparo neuronal, la secreción hormonal y la expresión génica dependiente de la actividad mediante la señalización de Ca2+/calmodulina y vías posteriores como CaMK y calcineurina/NFAT. En tejidos excitables, CACNA1D contribuye a la actividad marcapasos y a la plasticidad sináptica y transcripcional dependiente de calcio. La desregulación o variación genética en CACNA1D se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como a la fisiología endocrina y cardiovascular, lo que respalda su relevancia en la biología de canales iónicos y en estudios de mecanismos de enfermedad.
L-type Ca++ CP α1D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CACNA1D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CACNA1D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CACNA1D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CACNA1D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.