Plasmide CRISPR d'Activation (h) L-type Ca⁺⁺ CP α1C: sc-401062-ACT

CACNA1C code la sous-unité α1C formant le pore du canal calcique de type L CaV1.2, un médiateur majeur de l’entrée de Ca2+ dépendante du voltage dans les cellules humaines excitables et non excitables. L’ouverture du canal couple la dépolarisation membranaire à la signalisation intracellulaire du Ca2+, modulant le couplage excitation–contraction, l’activité pacemaker et la transcription dépendante de l’activité via des voies telles que CaM/CaMK et calcineurine–NFAT. L’entrée de calcium dépendante de CaV1.2 régule également la dynamique de libération des neurotransmetteurs et la plasticité synaptique via des effecteurs sensibles au calcium et des programmes d’expression génique en aval. Les variations génétiques ou une expression dérégulée de CACNA1C ont été associées à une électrophysiologie et une homéostasie calcique altérées dans des contextes de maladies cardiovasculaires et neuropsychiatriques, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation et de l’excitabilité cellulaire.

L-type Ca++ CP α1C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CACNA1C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

L-type Ca++ CP α1C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CACNA1C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CACNA1C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de L-type Ca++ CP α1C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CACNA1C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de L-type Ca++ CP α1C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie L-type Ca++ CP α1C dans les cellules tumorales présentant une expression de CACNA1C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.