Plásmido CRISPR de Activación (h) L-Selectin/CD62L/SELL: sc-401984-ACT

SELL codifica la L-selectina (CD62L), un receptor de adhesión expresado en leucocitos que media el anclaje inicial y el rodamiento sobre el endotelio vascular mediante la unión a ligandos sialilados y fucosilados. Esta interacción coordina el homing de linfocitos hacia los órganos linfoides secundarios y regula el tráfico de leucocitos durante la inflamación, integrándose con la señalización de “inside-out” impulsada por quimiocinas y con la remodelación del citoesqueleto para favorecer la extravasación. El desprendimiento (shedding) de L-selectina por metaloproteasas ajusta además la migración celular y los estados de activación, vinculando la dinámica de expresión de SELL con la vigilancia inmunitaria. Los niveles desregulados de CD62L o sus patrones de escisión se estudian con frecuencia en el contexto de la señalización inflamatoria, la autoinmunidad y la biología de las neoplasias hematológicas, donde un tráfico alterado repercute en la infiltración tisular.

L-Selectin/CD62L/SELL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SELL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

L-Selectin/CD62L/SELL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SELL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SELL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de L-Selectin/CD62L/SELL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SELL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de L-Selectin/CD62L/SELL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía L-Selectin/CD62L/SELL en células tumorales con expresión de SELL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.