KV3.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406541
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- KV3.1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico KV3.1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KV3.1 Anticuerpo (E-2): sc-514554
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
KV3.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406541 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
KCNC1 codifica la subunidad del canal de potasio dependiente de voltaje KV3.1, una conductancia de K⁺ de activación rápida y desactivación también rápida que favorece potenciales de acción breves y el disparo a alta frecuencia en células excitables. KV3.1 moldea la repolarización de la membrana y la precisión del disparo, influyendo en las oscilaciones de red y la temporización sináptica mediante la regulación de la excitabilidad neuronal. La actividad de KCNC1 se entrecruza con procesos más amplios de señalización de canales iónicos que coordinan la entrada de calcio, la probabilidad de liberación de neurotransmisores y la adaptación de la frecuencia de disparo. La variación genética o la desregulación de KCNC1 se ha asociado con fenotipos neurológicos que implican excitabilidad alterada, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de canalopatías y disfunción de circuitos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV3.1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV3.1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNC1 para la investigación de la señalización de KV3.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de KCNC1 críticos para la función de KV3.1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNC1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido KV3.1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KV3.1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV3.1 (h) y el plásmido HDR KV3.1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.