KV2.2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409737

Descripción general

KCNB2 codifica la subunidad KV2.2 de los canales de potasio dependientes de voltaje, un canal rectificador retardado que modela la repolarización de la membrana y regula los patrones de disparo neuronal. KV2.2 contribuye al control de la frecuencia de los potenciales de acción, la poshiperpolarización y la señalización dependiente de la excitabilidad, vinculando la actividad eléctrica con la dinámica del calcio y con respuestas transcripcionales posteriores. En el sistema nervioso central, los canales de la familia KV2 influyen en la integración sináptica y en la excitabilidad de las redes, y las alteraciones en la función de los canales de potasio se asocian de forma amplia con disfunción neurológica y con susceptibilidad a convulsiones y fenotipos del neurodesarrollo. Por lo tanto, el KCNB2 humano es una diana útil para desentrañar mecanismos dependientes de canales iónicos que acoplan el potencial de membrana con la fisiología neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV2.2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNB2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNB2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNB2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV2.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNB2 para la investigación de la señalización de KV2.2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNB2 críticos para la función de KV2.2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNB2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KV2.2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KV2.2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNB2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV2.2 (h) y el plásmido HDR KV2.2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNB2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNB2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.