Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV2.2 (h): sc-409737

Présentation

KCNB2 code pour la sous-unité KV2.2 d’un canal potassique voltage‑dépendant, un canal rectificateur retardé qui façonne la repolarisation membranaire et régule les schémas de décharge neuronale. KV2.2 contribue au contrôle de la fréquence des potentiels d’action, de l’hyperpolarisation post‑décharge et de la signalisation dépendante de l’excitabilité, reliant l’activité électrique à la dynamique du calcium et aux réponses transcriptionnelles en aval. Dans le système nerveux central, les canaux de la famille KV2 influencent l’intégration synaptique et l’excitabilité des réseaux, et une altération de la fonction des canaux potassiques est largement associée à des dysfonctionnements neurologiques ainsi qu’à une susceptibilité aux crises et à des phénotypes neurodéveloppementaux. KCNB2 humain constitue donc une cible utile pour disséquer les mécanismes dépendants des canaux ioniques qui couplent le potentiel de membrane à la physiologie neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KV2.2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KV2.2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNB2 pour l'étude de la signalisation de KV2.2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNB2 essentiels à la fonction de KV2.2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KV2.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KV2.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KV2.2 plasmide HDR (h) et le KV2.2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.