Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.6 (h): sc-409638

Présentation

KCNA6 code la sous-unité de canal potassique voltage‑dépendant KV1.6, un rectificateur retardé apparenté à Shaker qui façonne la repolarisation du potentiel d’action et régule la fréquence de décharge neuronale. En contribuant à la stabilité du potentiel de membrane et à l’excitabilité, KV1.6 influence la signalisation synaptique et les oscillations des réseaux neuronaux, s’intégrant aux processus de signalisation électrique contrôlés par les flux ioniques voltage‑dépendants. Les canaux de la famille KV1 participent à des voies qui modulent la libération de neurotransmetteurs, la conduction axonale et l’excitabilité dépendante de l’activité, et une conductance potassique altérée est largement impliquée dans les troubles d’hyperexcitabilité neuronale. Des variations ou une expression dérégulée de gènes de canaux potassiques K⁺ voltage‑dépendants ont été associées à des phénotypes neurologiques, ce qui étaye l’utilisation de la perturbation de KCNA6 pour étudier des mécanismes liés à l’excitabilité dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNA6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNA6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KV1.6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNA6 pour l'étude de la signalisation de KV1.6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNA6 essentiels à la fonction de KV1.6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNA6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KV1.6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KV1.6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNA6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KV1.6 plasmide HDR (h) et le KV1.6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNA6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNA6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.