Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Ku-86: sc-400549-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Ku-86 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ku-86 (h) y el plásmido de doble nickasa Ku-86 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a XRCC5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ku86 Anticuerpo (B-1): sc-5280
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Ku-86 | sc-400549-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Ku-86 | sc-400549-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XRCC5 codifica Ku-86 (Ku80), una subunidad central del heterodímero Ku que reconoce las roturas de doble cadena del ADN e inicia la unión de extremos no homóloga canónica (c-NHEJ). Al unirse a los extremos de ADN rotos y reclutar DNA-PKcs para formar el complejo DNA-PK, Ku-86 coordina el procesamiento de los extremos y la ligación para preservar la integridad del genoma durante el estrés replicativo y tras agresiones genotóxicas. La función de Ku-86 se solapa con la recombinación V(D)J, la recombinación de cambio de clase, el mantenimiento de los telómeros y los puntos de control de señalización del daño en el ADN. La desregulación de la reparación dependiente de XRCC5 se ha asociado con fenotipos de inestabilidad genómica y una sensibilidad alterada a agentes que dañan el ADN, lo que respalda su estudio frecuente en biología del cáncer, inmunología y mantenimiento del genoma relacionado con el envejecimiento.
Ku-86 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus XRCC5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de XRCC5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de XRCC5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con XRCC5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.