Plasmide Double Nickase (h) Ku-70: sc-400378-NIC

XRCC6 code la sous-unité Ku70 du hétérodimère Ku, un capteur central des cassures double brin de l'ADN qui se fixe aux extrémités de l'ADN et recrute DNA-PKcs afin d'initier la jonction d'extrémités non homologues classique (c-NHEJ). Ku70 participe à la recombinaison V(D)J, à la protection des télomères et aux réponses au stress de réplication, contribuant ainsi au maintien de la stabilité du génome au cours de la réponse aux dommages de l'ADN. Une perturbation de la fonction de Ku modifie le choix de voie entre la NHEJ et la recombinaison homologue et peut augmenter les translocations chromosomiques ainsi que la radiosensibilité. Une activité ou une expression dérégulée de XRCC6 a été associée à des phénotypes d'instabilité génomique observés dans de multiples contextes cancéreux, ainsi qu'à un développement altéré du système immunitaire en raison d'une jonction des extrémités défectueuse.

Ku-70 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XRCC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XRCC6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XRCC6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XRCC6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.