Ksr-2 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-402872-LAC-2

Das humane KSR2 (Kinase Suppressor of Ras 2) kodiert Ksr-2, eine Scaffold-/regulatorische Pseudokinase, die die RAF–MEK–ERK-Signalweiterleitung stromabwärts von RAS organisiert und so Amplitude, Dauer und subzelluläre Lokalisation des MAPK-Signalwegs feinabstimmt. Ksr-2 integriert zudem zelluläre Energie- und Nährstoffsignale über Interaktionen mit AMPK-assoziierten Netzwerken und verknüpft dadurch Wachstumsfaktor-Signale mit metabolischer Homöostase, mitochondrialer Funktion und adaptiven Antworten auf Energiestress. Genetische und funktionelle Studien bringen Störungen von KSR2 mit Erkrankungen der Energiebilanz und neuroendokrinen Regulation in Verbindung, darunter schwere Adipositas und Insulinresistenz, was seine Rolle bei der Koordination von Signalübertragung und Stoffwechsel unterstreicht. Gen-Editing-Reagenzien für KSR2 ermöglichen die mechanistische Aufklärung des Crosstalks zwischen MAPK und AMPK, der Umverdrahtung von Signalwegen sowie der zelltypspezifischen Regulation in relevanten humanen Zellmodellen.

Ksr-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KSR2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Ksr-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KSR2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Ksr-2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KSR2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.