Ksr-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402872-ACT

ヒトKSR2（Ksr-2）は、RAF–MEK–ERKモジュールの相互作用を編成することでMAPK/ERKシグナル伝達を統合・制御し、増殖因子受容体下流におけるシグナルの強度と持続時間を規定する足場（スキャフォールド）タンパク質をコードします。KSR2はまた、代謝制御へ収束するキナーゼシグナル伝達ネットワークを調節することで細胞のエネルギー恒常性にも関与し、有糸分裂促進性の刺激（ミトジェン）を栄養応答性プロセスへ結び付けます。これらの経路間の連関を通じて、KSR2活性の変化は、増殖制御・分化・全身代謝に関わる状況におけるシグナル伝達の破綻と関連付けられてきました。そのためKSR2は、肥満関連表現型、インスリン感受性、神経内分泌調節に関係するシグナル統合のモデルにおいて、しばしば研究対象となっています。

Ksr-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KSR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ksr-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KSR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKSR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ksr-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKSR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKsr-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKSR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKsr-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。