Plasmide CRISPR/Cas9 KO KRTAP14 (m): sc-423901

Présentation

Krtap14 code la protéine associée à la kératine 14, un petit composant structural riche en cystéine de la matrice de la tige pilaire chez la souris, qui contribue à la résistance mécanique et à la réticulation des filaments intermédiaires de kératine. KRTAP14 participe aux programmes de différenciation terminale des kératinocytes du follicule pileux et s’intègre aux processus qui régissent l’assemblage de la fibre capillaire, l’organisation de la cuticule et du cortex, ainsi que la stabilisation médiée par des ponts disulfure. Une expression modifiée ou des variations structurales des protéines associées à la kératine sont liées à des changements de texture du poil et à des phénotypes de fragilité, ce qui fait de Krtap14 un gène pertinent pour l’étude de l’intégrité de la tige pilaire et de la biologie folliculaire. Son expression est souvent considérée en parallèle des réseaux de kératinisation et des voies associées au complexe de différenciation épidermique, qui façonnent la formation des annexes cutanées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KRTAP14 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Krtap14 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Krtap14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Krtap14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KRTAP14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Krtap14 pour l'étude de la signalisation de KRTAP14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Krtap14 essentiels à la fonction de KRTAP14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Krtap14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KRTAP14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KRTAP14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Krtap14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KRTAP14 plasmide HDR (m) et le KRTAP14 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Krtap14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Krtap14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.