Plasmide Double Nickase (h) Krs-1: sc-416738-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Krs-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Krs-1 Double Nickase (h) et le plasmide Krs-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant STK3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Krs-1 Antibody (87.K): sc-130405
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Krs-1 | sc-416738-NIC | 20 µg | $410.00 |
STK3 code la kinase sérine/thréonine Krs-1 (également appelée MST2), un composant central de la cascade de signalisation Hippo qui freine la prolifération cellulaire et favorise l’apoptose via la régulation de LATS1/2 et des coactivateurs transcriptionnels YAP/TAZ. Krs-1 intègre des signaux provenant des contacts cellule–cellule, de la dynamique du cytosquelette et des voies de réponse au stress afin de moduler des programmes transcriptionnels qui gouvernent le contrôle de la croissance et l’homéostasie tissulaire. Par des interactions croisées avec les voies MAPK, PI3K–AKT et celles de l’apoptose, STK3 influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress oxydatif et génotoxique. La dérégulation des kinases de la voie Hippo, dont STK3, a été associée à des altérations du contrôle de la taille des organes et à des phénotypes liés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, de la biologie épithéliale et du remaniement des réseaux de signalisation.
Krs-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STK3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.