Plasmide CRISPR d'Activation (h) Krs-1: sc-416738-ACT

Le gène humain **STK3** code la kinase sérine/thréonine **Krs-1** (également appelée **MST2**), un composant central de la cascade de signalisation **Hippo**, qui limite la prolifération cellulaire et favorise l’inhibition de contact en phosphorylant des kinases en aval régulant la transcription dépendante de **YAP/TAZ**. Krs-1 intervient aussi dans les processus de réponse au stress et d’apoptose via des sorties de signalisation dépendantes de son activité kinase, qui influencent la dynamique du cytosquelette, la polarité cellulaire et les décisions de survie. La dérégulation de l’activité de **STK3** et de la voie Hippo est fréquemment étudiée dans le contexte d’altérations du contrôle de la croissance, de transitions épithélio-mésenchymateuses et de remaniements de la signalisation associés aux tumeurs. Ces caractéristiques font de STK3 un nœud utile pour disséquer le dialogue entre voies de signalisation et les programmes transcriptionnels qui gouvernent l’homéostasie tissulaire dans des modèles de cellules humaines.

Krs-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Krs-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Krs-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Krs-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Krs-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.