Plasmide Double Nickase (h) KRIT1: sc-404927-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) KRIT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KRIT1 Double Nickase (h) et le plasmide KRIT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRIT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KRIT1 Antibody (E-8): sc-514371
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) KRIT1 | sc-404927-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) KRIT1 | sc-404927-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRIT1 (Krev interaction trapped protein 1) code une protéine d’échafaudage essentielle à l’intégrité des jonctions endothéliales et à la morphogenèse vasculaire. KRIT1 assemble des complexes avec CCM2 et PDCD10 et s’interface avec la signalisation RAP1 afin de stabiliser les jonctions d’adhérence basées sur la VE‑cadherine, tout en modulant la tension cytosquelettique dépendante de RhoA/ROCK ainsi que les réponses associées des voies MAPK et du stress oxydatif. La perturbation de KRIT1 altère la fonction de barrière endothéliale et la stabilité de la lumière vasculaire, contribuant à la pathologie moléculaire des malformations caverneuses cérébrales (CCM) et à des phénotypes plus larges liés à l’homéostasie vasculaire. En tant que gène humain, KRIT1 est largement étudié dans les réseaux de signalisation endothéliale impliqués dans l’angiogenèse, la mécanotransduction et l’inflammation.
KRIT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRIT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRIT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRIT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRIT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.