KRAS Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416674-LAC

KRAS codifica una piccola GTPasi che funge da interruttore molecolare, alternando ciclicamente gli stati legati a GDP e a GTP per trasmettere segnali dai recettori tirosin-chinasici attivati agli effettori a valle. Attraverso le vie RAF–MEK–ERK (MAPK) e PI3K–AKT–mTOR, KRAS regola proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e dinamiche del citoscheletro, con ruoli aggiuntivi nella segnalazione mediata da RAL-GEF e nella riprogrammazione metabolica. La deregolazione della segnalazione di KRAS è fortemente associata alla trasformazione oncogena, all’alterazione del controllo dei feedback e a cambiamenti nelle interazioni con il microambiente tumorale in molteplici tipi di cancro. In quanto nodo centrale di segnalazione, KRAS è ampiamente studiato per il crosstalk tra vie, i meccanismi di resistenza e la mappatura genotipo-fenotipo in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale KRAS (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KRAS in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KRAS (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KRAS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KRAS. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KRAS e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.