KRAS Lentiviral Activation Particles (h): sc-416674-LAC

KRAS kodiert eine kleine GTPase, die als molekularer Schalter fungiert und zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um Signale von aktivierten Rezeptor-Tyrosinkinasen an nachgeschaltete Effektoren weiterzuleiten. Über die RAF–MEK–ERK-(MAPK)- und PI3K–AKT–mTOR-Signalwege reguliert KRAS Proliferation, Überleben, Differenzierung und Zytoskelettdynamik; zudem spielt es eine Rolle in der RAL-GEF-Signalgebung und bei metabolischer Umprogrammierung. Eine fehlregulierte KRAS-Signalgebung ist stark mit onkogener Transformation, veränderter Feedback-Kontrolle und Änderungen in der Interaktion mit der Tumormikroumgebung in zahlreichen Krebsarten verbunden. Als zentrales Signalknotenpunkt wird KRAS in menschlichen Zellmodellen häufig untersucht, etwa hinsichtlich Pathway-Crosstalk, Resistenzmechanismen und der Zuordnung von Genotyp zu Phänotyp.

KRAS Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KRAS-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

KRAS Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KRAS-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen KRAS-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KRAS-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.