Plasmide Double Nickase (h) kpm: sc-404134-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) kpm correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide kpm Double Nickase (h) et le plasmide kpm Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LATS2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: kpm Antibody (C-2): sc-515579
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) kpm | sc-404134-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) kpm | sc-404134-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LATS2 code une kinase sérine/thréonine qui constitue un nœud central suppresseur de tumeurs dans la voie Hippo. Elle phosphoryle YAP/TAZ afin de limiter leur activité nucléaire et de freiner des programmes transcriptionnels pro‑prolifératifs. Grâce à des interactions avec le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose, la dynamique des centrosomes et la régulation du cytosquelette, LATS2 contribue à l’inhibition de contact et au maintien de la stabilité du génome. Une activité altérée de LATS2 ou une dérégulation de la voie Hippo est associée à une signalisation de croissance aberrante et à des phénotypes oncogéniques dans de multiples contextes tissulaires. Par conséquent, LATS2 est fréquemment étudiée pour les mécanismes qui gouvernent l’homéostasie tissulaire, la mécanotransduction et la signalisation des points de contrôle (checkpoints) en réponse au stress.
kpm Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LATS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LATS2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LATS2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LATS2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.