Plasmide CRISPR/Cas9 KO KLRG1 (h): sc-409220

Présentation

KLRG1 (récepteur de type lectine des cellules cytotoxiques G1) est un récepteur inhibiteur exprimé par certaines sous-populations de cellules NK humaines ainsi que de lymphocytes T effecteurs/mémoire, où il contribue à ajuster la cytotoxicité et la production de cytokines lors de la surveillance immunitaire. En se liant à des cadherines telles que l’E-cadhérine, KLRG1 transmet un signal inhibiteur qui influence les seuils d’activation, la différenciation cellulaire, ainsi que des caractéristiques d’épuisement et de sénescence immunitaires. KLRG1 est largement utilisé comme marqueur pour phénotyper des populations lymphocytaires en phase de différenciation terminale et pour suivre les réponses induites par l’antigène dans les contextes d’infection chronique, d’inflammation et de microenvironnements tumoraux. Une dérégulation du tonus inhibiteur associé à KLRG1 est donc pertinente pour les études portant sur l’immunosuppression, la résidence tissulaire et les voies de type « checkpoint » qui façonnent l’immunité antivirale et antitumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KLRG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLRG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLRG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLRG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KLRG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLRG1 pour l'étude de la signalisation de KLRG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLRG1 essentiels à la fonction de KLRG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLRG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KLRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KLRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLRG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KLRG1 plasmide HDR (h) et le KLRG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLRG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLRG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.