Plasmide CRISPR/Cas9 KO KLF6 (h): sc-400888

Présentation

KLF6 code le facteur Krüppel-like 6, un facteur de transcription à doigts de zinc qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes géniques contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le remodelage tissulaire. Il intègre des signaux issus de voies telles que TGF-β/SMAD, ainsi que de réseaux transcriptionnels plus larges répondant au stress, pour moduler des gènes impliqués dans la prolifération et la régulation de la matrice extracellulaire. Une expression ou une fonction altérée de KLF6 a été associée à une dérégulation du contrôle de la croissance ainsi qu’à des processus inflammatoires ou fibrotiques, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le remodelage des programmes transcriptionnels dans des contextes pathologiques. Dans des modèles cellulaires humains, KLF6 sert de nœud pour examiner comment des facteurs de transcription coordonnent des changements phénotypiques via l’occupation des promoteurs et l’expression génique en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KLF6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLF6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLF6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KLF6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLF6 pour l'étude de la signalisation de KLF6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLF6 essentiels à la fonction de KLF6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLF6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KLF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KLF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLF6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KLF6 plasmide HDR (h) et le KLF6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLF6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLF6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.