Plasmide CRISPR d'Activation (h) KLF15: sc-402267-ACT

KLF15 (Krüppel-like factor 15) est un facteur de transcription à doigts de zinc qui régule des programmes métaboliques et de différenciation spécifiques à certains types cellulaires en se liant à des éléments promoteurs riches en GC et en coordonnant des réseaux transcriptionnels. Dans les tissus humains, il contribue au contrôle de l’expression de gènes de la néoglucogenèse et du métabolisme lipidique, module le catabolisme des acides aminés et s’articule avec des voies de signalisation hormonodépendantes qui façonnent la détection des nutriments et l’adaptation au stress. L’activité de KLF15 influence les sorties du métabolisme mitochondrial et oxydatif et peut modifier l’état cellulaire via une reprogrammation transcriptionnelle à large échelle. Une expression dérégulée de KLF15 a été associée à des phénotypes métaboliques et à des processus de remodelage dans des contextes musculaires et cardiovasculaires, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des études de voies de signalisation.

KLF15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLF15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KLF15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLF15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLF15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KLF15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLF15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KLF15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KLF15 dans les cellules tumorales présentant une expression de KLF15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.