Plasmide Double Nickase (m) KIR6.2: sc-421232-NIC

Kcnj11 code pour la sous-unité du canal potassique à rectification entrante KIR6.2, un composant central des canaux potassiques sensibles à l’ATP (KATP) qui relient l’état énergétique cellulaire à l’excitabilité membranaire. Dans les cellules β pancréatiques de souris, KIR6.2 s’associe aux récepteurs des sulfamides hypoglycémiants pour réguler la conductance au K+, l’entrée de calcium et la dynamique de sécrétion d’insuline en réponse aux variations du rapport ATP/ADP. Dans des tissus excitables, notamment le cœur, le cerveau et le muscle squelettique, l’activité des canaux KATP influence le déclenchement des potentiels d’action, les réponses au stress métabolique et la cytoprotection lors de contraintes énergétiques. Une dysrégulation du contrôle d’ouverture/fermeture des canaux liés à Kcnj11 a été associée à des altérations de l’homéostasie glucidique et à des phénotypes d’excitabilité, ce qui en fait une cible largement utilisée pour des études mécanistiques du couplage entre métabolisme et signalisation électrique.

KIR6.2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Kcnj11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Kcnj11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Kcnj11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Kcnj11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.