Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR6.1 (h): sc-401477

Présentation

KCNJ8 code la sous-unité du canal potassique à rectification entrante KIR6.1 (Kir6.1), un composant essentiel des canaux potassiques sensibles à l’ATP (KATP) qui couplent l’état métabolique cellulaire à l’excitabilité membranaire. Dans de nombreux tissus, Kir6.1 s’associe à des sous-unités du récepteur aux sulfonylurées pour réguler le flux de potassium en réponse aux variations des rapports ATP/ADP, influençant le tonus du muscle lisse vasculaire, les réponses cellulaires au stress et la signalisation dépendante de l’excitabilité. En reliant la détection des nucléotides à la conductance ionique, KIR6.1 contribue à des processus tels que la stabilisation du potentiel de membrane, la régulation du calcium et l’homéostasie bioénergétique. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de KCNJ8 ont été associées à des canalopathies et à des phénotypes cardiovasculaires, ce qui soutient son intérêt pour des études mécanistiques dans les cellules excitables et les contextes de signalisation métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR6.1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNJ8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNJ8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNJ8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR6.1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNJ8 pour l'étude de la signalisation de KIR6.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNJ8 essentiels à la fonction de KIR6.1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNJ8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIR6.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIR6.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNJ8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIR6.1 plasmide HDR (h) et le KIR6.1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNJ8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNJ8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.