Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.2 (m): sc-421234

Présentation

Kcnj15 code pour la sous-unité de canal potassique à rectification entrante KIR4.2, une protéine membranaire qui contribue à la conductance du potassium et aide à stabiliser le potentiel de membrane au repos dans les cellules excitables et non excitables. En régulant le flux de K+, KIR4.2 peut influencer l’équilibre osmotique cellulaire, l’excitabilité membranaire et des processus de signalisation dépendants des ions qui recoupent les voies de transport et l’homéostasie électrophysiologique. Une activité altérée des canaux potassiques est largement pertinente pour les études du transport rénal et épithélial, de la physiologie neuronale et gliale, ainsi que des réseaux de signalisation répondant au stress. Une gestion dérégulée des ions et le contrôle du potentiel de membrane sont également impliqués dans des mécanismes sous-jacents aux réponses inflammatoires et au dysfonctionnement tissulaire, ce qui fait de Kcnj15 une cible utile pour l’interrogation mécanistique des voies dans des systèmes de modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kcnj15 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kcnj15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kcnj15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR4.2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kcnj15 pour l'étude de la signalisation de KIR4.2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Kcnj15 essentiels à la fonction de KIR4.2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kcnj15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIR4.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KIR4.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kcnj15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIR4.2 plasmide HDR (m) et le KIR4.2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kcnj15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kcnj15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.