KIR4.2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421234

Panoramica

Kcnj15 codifica la subunità del canale del potassio a rettificazione entrante KIR4.2, una proteina di membrana che contribuisce alla conduttanza del potassio e aiuta a stabilizzare il potenziale di membrana a riposo in cellule eccitabili e non eccitabili. Regolando il flusso di K+, KIR4.2 può influenzare l’equilibrio osmotico cellulare, l’eccitabilità di membrana e i processi di segnalazione dipendenti dagli ioni che si intersecano con le vie di trasporto e con l’omeostasi elettrofisiologica. Un’alterata attività dei canali del potassio è ampiamente rilevante per studi sul trasporto renale ed epiteliale, sulla fisiologia neuronale e gliale e sulle reti di segnalazione responsiva allo stress. Una gestione disfunzionale degli ioni e un controllo alterato del potenziale di membrana sono inoltre implicati nei meccanismi alla base delle risposte infiammatorie e della disfunzione tissutale, rendendo Kcnj15 un bersaglio utile per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione in sistemi di modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kcnj15 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kcnj15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kcnj15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR4.2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kcnj15 per lo studio della segnalazione di KIR4.2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kcnj15 critici per la funzione di KIR4.2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kcnj15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR4.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KIR4.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kcnj15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR4.2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KIR4.2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kcnj15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kcnj15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.