Plasmide Double Nickase (h) KIR4.1: sc-402244-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) KIR4.1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KIR4.1 Double Nickase (h) et le plasmide KIR4.1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNJ10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KIR4.1 Antibody (1C11): sc-293252
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) KIR4.1 | sc-402244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) KIR4.1 | sc-402244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ10 code pour la sous-unité KIR4.1 d’un canal potassique rectifiant entrant, déterminant majeur du potentiel de membrane des cellules gliales et épithéliales, qui soutient le tamponnement du potassium, la redistribution spatiale de K+ et l’homéostasie osmotique. Dans le système nerveux central, l’activité de KIR4.1 dans les astrocytes contribue à l’élimination du K+ extracellulaire, couplée à la recapture du glutamate et aux flux d’eau, influençant l’excitabilité neuronale et la stabilité des réseaux. Le canal participe également aux processus de transport ionique dans les épithéliums du rein et de l’oreille interne, reliant la gestion du K+ à l’équilibre hydrique et électrochimique des tissus. Une dérégulation ou des variations génétiques de KCNJ10 ont été associées à des phénotypes d’hyperexcitabilité neurologique et à des tableaux de canalopathie syndromique impliquant le cerveau, le rein et la fonction auditive, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies d’homéostasie ionique.
KIR4.1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNJ10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNJ10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNJ10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNJ10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.