Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR2.3 (h): sc-406604

Présentation

KCNJ4 code le canal potassique à rectification entrante KIR2.3, une protéine membranaire tétramérique qui conduit préférentiellement K+ à des potentiels hyperpolarisés afin de stabiliser le potentiel de membrane au repos et de moduler l’excitabilité cellulaire. L’activité de KIR2.3 contribue à l’homéostasie du potassium et à la signalisation électrique, influençant des processus tels que la repolarisation du potentiel d’action et le couplage de l’excitabilité dans les tissus excitables. En tant que membre de la famille Kir2.x, il interagit fonctionnellement avec des voies dépendantes de la polarisation membranaire, notamment la signalisation dépendante du Ca2+ et le couplage stimulus–sécrétion. Une altération de la fonction des canaux à rectification entrante est pertinente pour les études d’électrophysiologie, des mécanismes arythmogènes et des dysfonctionnements des cellules excitables, faisant de KCNJ4 une cible utile pour disséquer la contribution des canaux ioniques aux phénotypes cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR2.3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNJ4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNJ4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNJ4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR2.3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNJ4 pour l'étude de la signalisation de KIR2.3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNJ4 essentiels à la fonction de KIR2.3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNJ4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIR2.3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIR2.3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNJ4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIR2.3 plasmide HDR (h) et le KIR2.3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNJ4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNJ4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.