Plásmido Doble Nickase (h) Kinectin 1: sc-404296-NIC

KTN1 codifica kinectina 1, una proteína integral de membrana enriquecida en el retículo endoplásmico que funciona como andamiaje para el transporte basado en microtúbulos. Al interactuar con motores de kinesina y con la maquinaria de tráfico asociada, la kinectina favorece el posicionamiento de orgánulos, la dinámica del RE y el movimiento direccional de vesículas que influyen en la secreción y el recambio de membranas. Estos procesos se entrecruzan con la remodelación del citoesqueleto, la señalización intracelular y las vías de proteostasis, que con frecuencia se ven alteradas bajo condiciones de estrés celular. Las alteraciones del transporte dependiente de kinectina y de la organización del RE se han estudiado en el contexto de la neurobiología y de otros trastornos en los que los defectos en el transporte axonal, el tráfico de membranas o la homeostasis del RE contribuyen a fenotipos relevantes para la enfermedad.

Kinectin 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KTN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KTN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KTN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KTN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.