KIF4A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411788

Descripción general

KIF4A codifica una proteína motora de la familia de las quinesinas que se asocia con los microtúbulos y la cromatina para coordinar la organización del huso mitótico, la condensación cromosómica y la segregación en anafase. Participa en procesos clave del ciclo celular, incluida la citocinesis y la regulación de la dinámica de la zona media del huso, favoreciendo una partición fiel del genoma durante la división proliferativa. La actividad de KIF4A se relaciona con la respuesta al daño del ADN y con vías de remodelación de la cromatina que influyen en la estabilidad genómica y en los resultados del estrés replicativo. La expresión desregulada de KIF4A se ha vinculado con fenotipos proliferativos y firmas de inestabilidad genómica observadas en múltiples contextos de investigación oncológica, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de vulnerabilidades asociadas a la mitosis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIF4A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KIF4A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KIF4A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KIF4A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIF4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KIF4A para la investigación de la señalización de KIF4A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KIF4A críticos para la función de KIF4A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KIF4A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIF4A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIF4A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KIF4A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIF4A (h) y el plásmido HDR KIF4A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KIF4A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KIF4A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.