Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF14 (h): sc-408805

Présentation

KIF14 code une protéine motrice de la famille des kinésines-3 associée aux microtubules, qui se localise au fuseau mitotique et au midbody afin de coordonner la ségrégation des chromosomes et la cytocinèse. Elle favorise la progression du cycle cellulaire en régulant la dynamique du fuseau, l’organisation du fuseau central et l’achèvement de l’abscission, reliant ainsi le transport dépendant des microtubules aux événements tardifs de la mitose. Une expression ou une activité aberrante de KIF14 est fréquemment associée, en biologie du cancer, à une capacité proliférative altérée, à l’aneuploïdie et à l’instabilité génomique. En conséquence, KIF14 est couramment étudiée dans les voies contrôlant la fidélité mitotique, le remodelage du cytosquelette et les programmes transcriptionnels associés à la prolifération.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KIF14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KIF14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KIF14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIF14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KIF14 pour l'étude de la signalisation de KIF14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KIF14 essentiels à la fonction de KIF14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KIF14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIF14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIF14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KIF14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIF14 plasmide HDR (h) et le KIF14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KIF14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KIF14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.