Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIAA1731 (h): sc-406955

Présentation

CEP295 (KIAA1731) code une protéine centrosomale essentielle à l’assemblage des centrioles et à la maturation du centrosome, en soutenant la formation du matériel péricentriolaire et le bon fonctionnement du centre organisateur des microtubules. Elle participe à des processus qui coordonnent la conversion centriole‑vers‑centrosome, la duplication du centrosome et la formation fidèle du fuseau mitotique pendant la mitose, contribuant ainsi à la stabilité du génome. La perturbation de l’intégrité du centrosome dépendante de CEP295 peut entraîner une progression mitotique aberrante et une instabilité chromosomique, des états cellulaires fréquemment étudiés en biologie du cancer. CEP295 est également pertinente pour les recherches sur la ciliogenèse et le contrôle du cycle cellulaire, où des défauts du centrosome peuvent modifier la dynamique des signaux et les programmes de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIAA1731 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CEP295 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CEP295, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CEP295 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIAA1731.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CEP295 pour l'étude de la signalisation de KIAA1731, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CEP295 essentiels à la fonction de KIAA1731
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CEP295 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIAA1731 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIAA1731 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CEP295. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIAA1731 plasmide HDR (h) et le KIAA1731 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CEP295 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CEP295 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.