Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIAA1432 (h): sc-417074

Présentation

RIC1 (KIAA1432) code un composant conservé du complexe facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) RIC1–RGP1, qui régule le trafic membranaire dépendant de Rab6. Ce complexe favorise l’arrimage et le transport rétrograde des endosomes vers le réseau trans-golgien et contribue à l’organisation de l’appareil de Golgi, à l’amarrage des vésicules et à la sécrétion polarisée. Par son rôle dans le maintien de l’intégrité du Golgi et de la fidélité du transport intracellulaire, KIAA1432 est pertinent pour des phénotypes cellulaires liés à la migration, à l’adhésion et à la protéostasie. Un trafic vésiculaire déréglé et des voies associées au Golgi sont fréquemment impliqués dans la biologie des maladies prolifératives et neurodéveloppementales, ce qui fait de RIC1 une cible utile pour des études mécanistiques des signalisations dépendantes du trafic.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIAA1432 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RIC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RIC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RIC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIAA1432.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RIC1 pour l'étude de la signalisation de KIAA1432, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RIC1 essentiels à la fonction de KIAA1432
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RIC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIAA1432 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIAA1432 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RIC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIAA1432 plasmide HDR (h) et le KIAA1432 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RIC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RIC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.