Plasmide Double Nickase (h) Ketohexokinase: sc-403399-NIC

Le gène humain **KHK** code la **cétohexokinase** (fructokinase), une enzyme **ATP‑dépendante** qui catalyse la phosphorylation du fructose en **fructose‑1‑phosphate**, amorçant le métabolisme hépatique du fructose. Cette réaction alimente ensuite le flux de carbone, médié par **l’aldolase B**, vers la **glycolyse**, la **néoglucogenèse** et la **lipogenèse**, reliant le traitement du fructose alimentaire à l’équilibre énergétique cellulaire et à la signalisation métabolique. L’activité de KHK influence le renouvellement des nucléotides et la production d’**acide urique** via la consommation d’ATP et le piégeage du phosphate, et est donc pertinente pour l’étude des réponses au stress métabolique. Une expression ou une fonction altérée de KHK a été associée à des erreurs innées du métabolisme du fructose ainsi qu’à des phénotypes plus larges de maladies métaboliques, ce qui en fait un nœud pertinent pour des investigations mécanistiques dans des modèles d’hépatocytes et de rein.

Ketohexokinase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KHK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KHK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KHK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KHK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.