Partículas Lentivirales de Activación (h) Keap1: sc-400190-LAC

KEAP1 humano codifica Keap1, un adaptador de sustrato del complejo ligasa E3 de ubiquitina CUL3–RBX1 que controla el recambio proteasomal de NRF2 (NFE2L2) y, de este modo, ajusta las respuestas al estrés antioxidante y a xenobióticos. Al detectar electrófilos y especies reactivas de oxígeno mediante dominios ricos en cisteína, Keap1 regula la acumulación nuclear de NRF2 y la transcripción de genes citoprotectores implicados en el metabolismo del glutatión, la regeneración de NADPH y la desintoxicación de fase II. Este eje KEAP1–NRF2 integra la homeostasis redox con la reprogramación metabólica, la señalización inflamatoria y la autofagia a través de interacciones con proteínas como p62/SQSTM1. La desregulación del control de NRF2 dependiente de KEAP1 se estudia con frecuencia en contextos de biología del estrés oxidativo, incluida la carcinogénesis, fenotipos asociados a quimiorresistencia y modelos de lesión tisular crónica.

Las partículas de activación lentiviral Keap1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KEAP1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Keap1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KEAP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Keap1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KEAP1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.