Plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 3 (m): sc-430617

Présentation

Kdelr3 code le récepteur KDEL 3, un récepteur de récupération résidant dans l’appareil de Golgi qui reconnaît le motif KDEL C‑terminal des chaperons luminales du RE ayant « échappé » et les renvoie du Golgi vers le réticulum endoplasmique via un trafic rétrograde dépendant de COPI. En maintenant la protéostasie du RE et l’homéostasie du calcium, KDELR3 influence la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), la fidélité de la voie sécrétoire et le remodelage adaptatif au stress du compartiment sécrétoire précoce. Une perturbation de la récupération médiée par les récepteurs KDEL peut modifier la maturation des glycoprotéines et la sensibilité au stress du RE, des processus fréquemment exploités dans des études sur la neurodégénérescence, le stress métabolique et les exigences sécrétoires des cellules tumorales. Dans les systèmes murins, Kdelr3 constitue un nœud expérimental pertinent pour disséquer la manière dont le transport RE–Golgi s’articule avec les réseaux de protéostasie et les transitions d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kdelr3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kdelr3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kdelr3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KDEL receptor 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kdelr3 pour l'étude de la signalisation de KDEL receptor 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Kdelr3 essentiels à la fonction de KDEL receptor 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kdelr3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KDEL receptor 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KDEL receptor 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kdelr3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KDEL receptor 3 plasmide HDR (m) et le KDEL receptor 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kdelr3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kdelr3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.