Plasmide Double Nickase (m) KCTD5: sc-427353-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) KCTD5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KCTD5 Double Nickase (m) et le plasmide KCTD5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Kctd5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) KCTD5 | sc-427353-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Kctd5* code KCTD5, une protéine contenant un domaine BTB/POZ qui agit comme adaptateur au sein des complexes d’ubiquitine-ligase E3 de type culline-RING, en favorisant la reconnaissance des substrats et le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. En régulant la protéostasie, KCTD5 peut influencer la progression du cycle cellulaire, la transduction du signal et des processus synaptiques ou neuronaux en modulant la stabilité des composants des voies de signalisation. Une activité altérée de la voie ubiquitine–protéasome est largement impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et dans la reprogrammation de la signalisation associée au cancer, ce qui fait de *Kctd5* un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle qualité des protéines. Dans les systèmes de modèles murins, la perturbation de *Kctd5* aide à explorer comment l’ubiquitination s’interface avec les réponses au stress cellulaire et les programmes de différenciation.
KCTD5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Kctd5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Kctd5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Kctd5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Kctd5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.