Plasmide CRISPR d'Activation (h) KCNQ4: sc-403090-ACT

KCNQ4 code une sous-unité de canal potassique voltage‑dépendant qui contribue aux courants potassiques de type M (K+) et participe à l’établissement du potentiel de membrane au repos ainsi qu’à l’excitabilité cellulaire. En régulant la repolarisation membranaire et l’homéostasie des ions potassium, KCNQ4 influence la signalisation électrophysiologique dans les tissus excitables, notamment les épithéliums sensoriels. Une activité dysrégulée de KCNQ4 a été associée à des troubles auditifs et à des phénotypes de surdité neurosensorielle progressive, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la physiologie des cellules ciliées cochléaires et des réponses au stress dépendantes des canaux ioniques. KCNQ4 sert également de point d’entrée mécanistique pour explorer les programmes de signalisation associés aux canalopathies et les adaptations transcriptionnelles induites par une conductance K+ altérée.

KCNQ4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KCNQ4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KCNQ4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KCNQ4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KCNQ4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KCNQ4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KCNQ4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KCNQ4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KCNQ4 dans les cellules tumorales présentant une expression de KCNQ4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.