Plasmide Double Nickase (h) KCNQ2: sc-402492-NIC

KCNQ2 code une sous-unité de canal potassique voltage‑dépendant qui s’assemble pour former les courants neuronaux de type M (Kv7), modulant le potentiel de membrane au repos et régulant le déclenchement des potentiels d’action. En contrôlant l’excitabilité sous‑seuil et l’adaptation de la fréquence de décharge, KCNQ2 s’intègre à des processus de signalisation qui couplent la dynamique du potentiel de membrane à la neurotransmission et à la stabilité des réseaux. Une altération de la fonction de KCNQ2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et liés à l’épilepsie, ce qui en fait une cible majeure pour disséquer les mécanismes de l’excitabilité et de la régulation des circuits synaptiques dans des modèles cellulaires humains. Les applications de recherche incluent couramment l’étude de la biophysique des canaux ioniques, des effets sur la différenciation neuronale et des changements, au niveau des voies, de l’expression génique dépendante de l’activité.

KCNQ2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNQ2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNQ2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNQ2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNQ2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.