Plasmide Double Nickase (h) KCNQ1: sc-400933-NIC

KCNQ1 code la sous-unité α d’un canal potassique voltage‑dépendant, qui s’assemble en tétramère et, dans de nombreux tissus, s’associe aux sous-unités β de la famille KCNE pour façonner la repolarisation membranaire. Dans les cellules excitables, les courants médiés par KCNQ1 contribuent à la terminaison du potentiel d’action et à la stabilité électrique, tandis que dans les épithéliums, le canal participe à la régulation du transport ionique et de l’homéostasie hydrique. L’activité du canal est modulée par des signaux tels que la phosphorylation dépendante de l’AMPc/PKA et les phosphoinositides membranaires, reliant KCNQ1 au contrôle plus large de l’excitabilité cellulaire et des processus de transport. Des altérations génétiques et épigénétiques de KCNQ1 ont été associées à des phénotypes d’arythmie cardiaque et à une dérégulation d’un locus soumis à l’empreinte parentale, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques en électrophysiologie et en régulation génique.

KCNQ1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNQ1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNQ1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNQ1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNQ1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.