Plasmide CRISPR/Cas9 KO KCNH1 (h): sc-405756

Présentation

KCNH1 code un canal potassique voltage‑dépendant (Kv10.1/Eag1) qui régule le potentiel de membrane et le flux de potassium, modulant ainsi l’excitabilité cellulaire et les voies de signalisation en aval dépendantes du calcium. Au‑delà de ses propriétés électriques, l’activité de KCNH1 influence la progression du cycle cellulaire, la prolifération et la dynamique du cytosquelette via des mécanismes de contrôle bioélectrique et une modulation du canal dépendante de la phosphorylation. L’expression de KCNH1 a été rapportée dans des contextes neuronaux et non neuronaux, reliant l’activité du canal à des processus tels que les patrons de décharge neuronale et la signalisation dépendante des stimuli. La dérégulation de KCNH1 est associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et a été étudiée dans le contexte d’une signalisation de croissance aberrante en biologie du cancer, ce qui appuie son utilisation dans des études mécanistiques des voies pilotées par les canaux ioniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KCNH1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KCNH1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNH1 pour l'étude de la signalisation de KCNH1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNH1 essentiels à la fonction de KCNH1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KCNH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KCNH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KCNH1 plasmide HDR (h) et le KCNH1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.