Plasmide CRISPR/Cas9 KO KCC2 (h): sc-402080

Présentation

SLC12A5 code le cotransporteur neuronospécifique K+-Cl− KCC2, un régulateur clé de l’homéostasie intracellulaire du chlorure qui permet une neurotransmission GABAergique et glycinergique hyperpolarisante. En favorisant l’extrusion de Cl−, KCC2 module la force des synapses inhibitrices, l’excitabilité membranaire et la maturation des circuits neuronaux, et il s’interface fonctionnellement avec des voies de transport ionique et de signalisation synaptique qui régissent la plasticité dépendante de l’activité. Une expression ou une fonction altérée de KCC2 a été associée à une perturbation de l’équilibre excitation–inhibition dans le système nerveux central, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de l’épilepsie, des troubles du neurodéveloppement, des douleurs neuropathiques et de la neurodégénérescence. KCC2 est également utilisé comme marqueur et nœud mécanistique pour étudier le développement des synapses inhibitrices, la dynamique du chlorure et les oscillations des réseaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KCC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC12A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC12A5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC12A5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KCC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC12A5 pour l'étude de la signalisation de KCC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC12A5 essentiels à la fonction de KCC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC12A5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KCC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KCC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC12A5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KCC2 plasmide HDR (h) et le KCC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC12A5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC12A5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.