Plasmide Double Nickase (h) karyopherin β2: sc-403099-NIC

TNPO1 code la karyophérine β2 (transportine-1), un récepteur d’import nucléaire régulé par RanGTP qui reconnaît les signaux de localisation nucléaire de type PY et assure le transport sélectif de protéines liant l’ARN et d’autres cargos à travers le complexe du pore nucléaire. Cette voie d’import soutient le métabolisme de l’ARN, la dynamique des granules de stress et la répartition nucléo-cytoplasmique de facteurs régulateurs, reliant l’activité de TNPO1 au contrôle de l’expression génique et à la protéostasie. Des altérations du trafic dépendant de la transportine ont été associées à des perturbations du traitement de l’ARN et à des phénotypes d’agrégation protéique observés dans la biologie liée aux maladies neurodégénératives, ainsi qu’à des programmes de signalisation prolifératifs dans des modèles de cancer. Par conséquent, TNPO1 est fréquemment étudié pour disséquer les mécanismes de spécificité du transport nucléaire, le couplage au cycle de Ran, et la manière dont des RBP mal localisées affectent l’homéostasie cellulaire.

karyopherin β2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNPO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNPO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNPO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNPO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.