Plasmide Double Nickase (h) karyopherin α1: sc-402324-NIC

KPNA1 code la karyophérine alpha 1 (importine-α5), un adaptateur de la voie classique d’import nucléaire qui reconnaît les signaux de localisation nucléaire basiques (NLS) sur les protéines cargo et les associe à l’importine-β pour une translocation dépendante de la GTPase Ran à travers le complexe du pore nucléaire. En contrôlant le trafic nucléocytoplasmique, KPNA1 influence la progression du cycle cellulaire, la signalisation des dommages à l’ADN, les réponses transcriptionnelles de l’immunité innée et les programmes d’adaptation au stress, en régulant l’accès nucléaire de facteurs de transcription et d’enzymes régulatrices. Des altérations du transport médié par les importines ont été associées à des réseaux de signalisation dérégulés et au remodelage des états d’expression génique observés dans le cancer ainsi que dans des contextes neurodégénératifs et inflammatoires. KPNA1 est également étudiée dans les interactions hôte–pathogène, où l’import nucléaire d’effecteurs viraux ou bactériens peut moduler la réplication et les mécanismes d’échappement immunitaire.

karyopherin α1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KPNA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KPNA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KPNA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KPNA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.