Plasmide CRISPR d'Activation (h) KAI 1: sc-401317-ACT

CD82 (KAI1) est une glycoprotéine de surface cellulaire de la famille des tétraspanines, qui organise des microdomaines membranaires et module la signalisation en s’associant aux intégrines, aux récepteurs de la famille de l’EGFR et à d’autres tétraspanines. En régulant l’adhésion, la migration et la dynamique du cytosquelette, KAI1 influence des processus tels que le trafic des cellules immunitaires, les interactions avec la matrice extracellulaire et la communication vésiculaire. CD82 a été largement étudiée dans le contexte de la biologie des métastases, où des variations d’expression sont corrélées à des changements du potentiel invasif et à des phénotypes associés à la transition épithélio-mésenchymateuse. La dérégulation des réseaux de signalisation dépendants de CD82 a également été reliée à la progression tumorale et au remodelage du microenvironnement inflammatoire dans plusieurs modèles de maladie.

KAI 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD82 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KAI 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD82 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD82, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KAI 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD82 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KAI 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KAI 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD82 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.