Plasmide CRISPR/Cas9 KO JRAB (h): sc-410130

Présentation

MICALL2 code JRAB (également appelé MICAL-L2), un effecteur de Rab13 qui agit comme une protéine d’échafaudage reliant la machinerie du trafic vésiculaire au remodelage du cytosquelette d’actine au niveau des jonctions intercellulaires. JRAB participe à la régulation de l’organisation des jonctions d’adhérence et des jonctions serrées, au recyclage membranaire et au transport polarisé, influençant l’intégrité de la barrière épithéliale et la migration directionnelle. Par ses interactions avec les GTPases Rab et des composants jonctionnels, MICALL2 contribue à des voies contrôlant la dynamique du cytosquelette et le transport intracellulaire. Une expression ou une régulation altérée de MICALL2 a été rapportée dans des études sur l’invasion tumorale et des phénotypes liés aux métastases, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes de perte de polarité cellulaire et de motilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JRAB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MICALL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MICALL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MICALL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JRAB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MICALL2 pour l'étude de la signalisation de JRAB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MICALL2 essentiels à la fonction de JRAB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MICALL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JRAB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le JRAB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MICALL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JRAB plasmide HDR (h) et le JRAB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MICALL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MICALL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.