Plasmide CRISPR/Cas9 KO JNK1 (bovine): sc-437283

Présentation

JNK1 (MAPK8) est une kinase protéique activée par le stress de la famille des MAP kinases (mitogen-activated protein kinases) qui intègre des signaux en amont provenant des cytokines, des facteurs de croissance, des espèces réactives de l’oxygène et des dommages à l’ADN afin de réguler des programmes transcriptionnels via des cibles telles que c-Jun et d’autres composants d’AP‑1. Dans les cellules bovines, JNK1 contribue au contrôle de l’apoptose, de la signalisation inflammatoire et de la différenciation en coordonnant des cascades MAPK qui croisent les voies de NF‑κB, de la signalisation de l’insuline et des réponses associées au TGF‑β. L’activité de JNK1 influence des issues cellulaires telles que la prolifération, la migration et le remodelage de la matrice extracellulaire, ce qui la rend pertinente pour des modèles de stress tissulaire, de dérégulation métabolique et d’activation immunitaire. Une signalisation JNK dérégulée a été largement associée à des pathologies inflammatoires et dégénératives, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud mécanistique dans des recherches centrées sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JNK1 (bovine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires bovine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JNK1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de JNK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de JNK1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JNK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine) et le JNK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JNK1 plasmide HDR (bovine) et le JNK1 (bovine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.